Leihmania infantum es el agente causal de la leishmaniasis viceral canina y humana en Paraguay. Una alta proporción de canes infectados y un aumento en el número de casos humanos, hacen necesario un control más eficaz de la enfermedad así como también una evaluación más profunda de la epidemiología de la misma. En la actualidad lo que se busca es la aplicación de técnicas moleculares sesnsibles que detecten el ADN del parásito y que permitan caracterizarlo directamente en muestras biológicas. En el presente trabajo se estudió la diversidad genética de la especie Leishmania infantum, mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa, empleando como blanco molecular los minicírculos del ADNK seguido por cortes con la enzima de restricción Rsal, con el fin de evaluar la asociación genotípica de los parásitos encontrados en muestras humanas y caninas. El análisis de las 53 muestras, que incluye tanto a muestras biológicas de humos y caninos además de parásitos aislados en cultivo, mostraron un alto grado de polimorfismo genético con un total de 19 perfiles diferentes separados en 5 clusters. No se observó tendencia de agrupamiento de acuerdo al tipo de muestra, más bien una tendencia de agrupamiento debido a la región geográfica, pero sí se observaron perfiles compartidos por parásitos de muestras de humanos y perros, lo que confirma el patrón epidemiológico ya conocido. Se observó además, una selección clonal de los parásitos en cultivo al no presentar los mismos perfiles las formas amastigote, presente en l a muestra biológica y su correspondiente aislado en cultivo, la forma promastigote. El estudio de la variación genética en Leishmania no sólo podría tener implicancias importantes para el control de la enfermedad, sino que también ayudaría a dilucidar la evolución biológica del agente causal de leishmaniosis visceral.