Estandarización de una técnica de RT-PCR anidada para detección de alfavirus
Standardization of a nested RT-PCR technique for alphavirus detection
Mem. Inst. Invest. Cienc. Salud (Impr.); 15 (2), 2017
Año de publicación: 2017
El género Alphavirus está constituido por virus de ARN de los cuales, varias especies son causantes de enfermedades humanas y animales como los virus chikungunya, Mayaro y los virus de encefalitis equinas, por lo que son considerados un problema de salud pública a nivel regional. En Paraguay han sido reportadas infecciones humanas por chikungunya pero son necesarios más estudios para ampliar conocimientos sobre circulación y ecoepidemiología de los alfavirus. La transcripción reversa de ARN seguida de una reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) anidada es de gran utilidad como herramienta diagnóstica y en la vigilancia epidemiológica. El objetivo de este estudio fue definir las condiciones óptimas de reacción y determinar el límite de detección para una RT-PCR anidada para la detección genérica de alfavirus. El límite de detección obtenido, de 0,47 UFP/mL, indica una alta sensibilidad, pudiéndose aplicar la técnica a muestras humanas y animales de suero, líquido cefalorraquídeo, órganos y a pooles de mosquitos. Este trabajo servirá de base a otros estudios de detección e identificación de especies de alfavirus circulantes en nuestro país, lo que contribuiría a fortalecer su vigilancia y prevención.
The genus Alphavirus consists of RNA viruses of which several species areresponsible for human and animal diseases, such as chikungunya, Mayaro and equineencephalitis viruses, and are therefore considered a regional public health problem. InParaguay, human infections have been reported by chikungunya, but more studies areneeded to increase knowledge on the circulation and ecoepidemiology of alphaviruses.Reverse RNA transcription followed by a nested polymerase chain reaction (RT-PCR) isvery useful as a diagnostic tool and in epidemiological surveillance. The objective ofthis study was to define optimal reaction conditions and to determine the limit ofdetection for a nested RT-PCR for generic alphavirus detection. The detection limitobtained, of 0,47 PFU/mL, indicate high sensitivity, and the possibility of applying thetechnique to human and animals samples of serum, cerebrospinal fluid, organs andmosquito pools. This work will serve as a basis for other studies of detection andidentification of alphavirus species circulating in our country, which would helpstrengthen the surveillance and prevention.
