La colonización del Estreptococo grupo B en la embarazada está relacionada a patologías perinatales, constituyéndose en una causa muy importante de morbi-mortalidad neonatal. De manera a reducir dicha morbi-mortalidad, el Centro de Control y Prevención de Enfermedades Infecciosas de Estados Unidos desarrolló una estrategia que consiste en realizar el cultivo de muestra tanto vaginal como ano-rectal de todas las mujeres entre 35 y 37 semanas de gestación. El objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de colonización por Estreptococo β hemolítico grupo B en mujeres gestantes entre las 35-37 semanas de embarazo que concurrieron al Hospital Materno-Infantil San Pablo, Centro de Salud Nº 5, desde abril del 2010 a agosto del 2011. Se realizó un estudio con diseño observacional descriptivo de corte transverso. Las muestras fueron tomadas mediante hisopado de introito vaginal y ano-rectal, colocadas en medio de transporte Stuart y remitidas al Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud para el cultivo en agar sangre, previo enriquecimiento en caldo Todd Hewitt. La identificación bacteriana se realizó mediante pruebas bioquímicas convencionales y la confirmación mediante aglutinación con látex. La frecuencia de colonización obtenida fue relativamente alta, de 23,6%. Los resultados de este estudio permiten dimensionar la problemática en nuestro país y evidenciar la necesidad de la implementación de un programa a nivel nacional para la detección del Estreptococo grupo B de forma rutinaria en las embarazadas. De esta manera, se podrá disminuir la morbi-mortalidad perinatal y materna con la administración oportuna del tratamiento profiláctico.