Maytenus ilicifolia es un arbusto empleado como medicación natural en Paraguay, Brasil, Argentina y Uruguay. Entre sus propiedades se cita la actividad antimicrobiana. El objetivo del estudio experimental in vitro fue evaluar el efecto antibacteriano del extracto etanólico de Maytenus ilicifolia Martius frente a Streptococcus mutans y Staphylococcus aureus. Se determinó el efecto de tres concentraciones C1 47,76 mg/mL, C2 24,4 mg/mL y C3 12,8 mg/mL, frente a cepas bacterianas de Streptococcus mutans ATCC 25175 y de Staphylococcus aureus ATCC 6538, mediante el método de difusión en pozo en agar Mueller Hinton. Se realizó un ensayo por triplicado para cada cepa con las diferentes concentraciones del extracto, incluyendo un control positivo de Gluconato de Clorhexidina 0,12% y un control negativo de solución fisiológica 0,9%. La C1 47,76 mg/mL tuvo efecto antibacteriano sobre ambas cepas. La media de halo de inhibición para Streptococcus mutans fue de 11,68 mm correspondiendo al 67,2% de efecto inhibitorio y la media de halo de inhibición para Staphylococcus aureus fue de 9,39 mm, correspondiendo al 51,82% de efecto inhibitorio en relación con el Gluconato de Clorhexidina 0,12%. Se concluyó que el extracto etanólico de Maytenus ilicifolia Martius posee efecto antibacteriano para Streptococcus mutans y Staphylococcus aureus.